TIPOS DE MICROSCOPIOS


Microscopio Óptico: basado en lentes ópticos. El desarrollo de este aparato se asocia con los trabajos de Antón Van Leeuwnhowk.

Sistema óptico:
Ocular: Lente situado cerca del ojo del observador. Amplía la imagen del objetivo.
Objetivo: Lente situado cerca de la preparación. Amplía la imagen de ésta.
Sistema luminoso
Condensador: Lente que concentra los rayos luminosos sobre la preparación.
Diafragma: Regula la cantidad de luz que entra en el condensador.
Foco: dirige los rayos luminosos hacia el condensador.
PARTES
Sistema mecánico: 
Soporte: Mantiene la parte óptica. Tiene dos partes: el pie o base y el brazo.
Platina: Lugar don se deposita la preparación.
Cabezal: Contiene los sistemas de lentes oculares.  Puede ser monocular, bicular.
Revolver: Contiene los sistemas de lentes objetivos. Permite, al girar cambiar los objetivos.
Tornillo de enfoque: Macrométrico aproxima el enfoque y Micrométrico consigue el enfoque correcto-.
MANEJO
1.       Colocar el objetivo de menor aumento en posición de empleo y bajar la platina completamente.
2.       Colocar la preparación sobre la platina sujetándola con las pinzas metálicas.
3.       Comenzar la observación con el objetivo 4x  (esta en posición) o colocar el de 10 aumento o 10x  si la preparación es de bacteria; para iniciar el enfoque.
4.       Acerque al máximo la lente del objetivo a la preparación, empleando en tornillo macrométrico. Esto debe hacerse mirando directamente y no a través del ocular, porque corre el riesgo de incrustar el objetivo en la preparación pudiendo dañar algunos de ellos o ambos.
5.       Mirando a través de los oculares, ir separando lentamente el objetivo de la preparación con el micrométrico y cuando se observe algo nítido la muestra, girar el micrométrico hasta obtener un enfoque fino.
Microscopio Simple: al contrario del microscopio óptico estándar, tiene un solo lentes de aumento, ejemplo la lupa. El objeto ha observar se coloca entre el foco y la superficie de la lente, determinando la formación de una imagen virtual, derecha.
Microscopio compuesto: es un microscopio óptico que tiene más de una lente. Se utiliza para examinar objetos transparentes o cortados en láminas tan finas. Aumentan o amplían las imágenes de objetos y organismos no visibles a simples vista; están compuesto por tres sistemas:
1.       Sistema mecánico constituido por una serie de piezas en las que van instalada las lentes que permiten el movimiento para el enfoque.
2.       Sistema óptico conjunto de lentes dispuestas de tal manera que producen el aumento de las imágenes que se observan a través de ellas.
3.       Sistema de iluminación comprenden las partes del microscopio que reflejan, transmiten y regulas la cantidad de luz necesaria para efectuar la observación por el microscopio.
Microscopio de Luz Ultravioleta: depende de la absorción de la luz por las moléculas de la muestra, tiene una longitud de 200nm, y alcanzar una resolución de 0,1 u. No se puede observar a través del ocular por que dañarían la retina del ojo, permite detectar los ácidos nucleicos, proteínas que contiene determinados aminoácidos, se puede obtener mediciones espectrofotométricas para cuantificar el ADN y ARN de cada célula. Los elementos ópticos están hechos de cuarzo, fluorita o sistemas de espejos aluminizados.
Microscopio de fluorescencia: la lente de vidrio es sustituida por lentes de cuarzo y la iluminación se produce por una lámpara de mercurios, se usa filtro y se observa en placa fotográfica, la observación es directa.
Microscopio petrográfico: o de polarización, identifica y cuantifica los componentes minerales de las rocas ígneas y morfológicas. Cuenta con un prisma de Nicol o analizador para polarizar la luz que pasa a través del espécimen examinando, indicando sus cambios de polarización.
  
Microscopio en campo oscuro: utiliza luz muy intensa en forma de cono hueco concentrado sobre el espécimen; el campo de visión esta en la zona hueca, es útil en elementos biológicos transparentes y sin manchas, invisibles con iluminación normal, muestras metalográficas para observar detalles de alta reflectancia. Está equipado con un condensador especial que ilumina la muestra con luz fuerte indirecta, el campo visual se observa como un fondo oscuro sobre el cual aparecen partículas brillas que reflejan la luz hacia el objetivo.
Microscopio de contraste de fase: visualiza objetos incoloros, usa iluminación por varios sitios y se miden diferencias de fase para poder ver el objeto.
Microscopio de luz polarizada: se le han añadido dos polarizadores, que son cristales de cuarzo y de Nicol.: unos entre condensado y la nuestra; y el otro entre la muestra y el observador. Dejan pasar solo la luz que vibra en un único plano (luz polarizada)
Microscopio confocal: obtiene imágenes tridimensionales de la célula, Tiene un principio similar al de un microscopio de fluorescencia, pero utiliza dos diafragmas confocales (unos antes y después de la muestra), enfoca la iluminación en un único punto de la muestra, el láser es la fuente de iluminación, barre la muestra por todo su volumen, plano a plano, creando imágenes bidimensionales que un ordenador interpreta, generando una imagen tridimensional.
Microscopio electrónico: usa electrones en vez de fotones o luz visible para formar imágenes de objetos diminutos hasta 500 000aumentos. Funciona con un haz de electrones acelerado por un alto voltaje y focalizado por medio de lentes magnéticos que forman una imagen sobre la placa fotográfica o sobre una pantalla sensible al impacto de los electrones que transfieren  la imagen.
Microscopio electrónico de transmisión: usa un haz de electrones para visualizar un objeto a su máxima potencia amplificadoras
Microscopio de iones de campo: se usa para visualizar la ordenación de los átomos que forma la superficie de la punta afilada de una aguja de metal. Primera técnica que visualiza espacialmente átomos individuales.
Microscopio de sonda de barrido: tiene un transmisor en la parte exequimal del lente (objetivo 4x), su uso es de regular la imagen mediante un barrido de electrones haciendo que la imagen aumente 10 000 000nm
Microscopio de fuerza atómica: siglas en inglés AFM. Instrumento mecánico-óptico detecta fuerzas del orden de los piconewton; rastrea y registra  muestras fotográficas tridimensionales mediante el uso o punta afilada en forma piramidal o cónica que esta acoplada a un listón o palanca microscópica  flexible con un haz de láser de 200 um de longitud. Todos los movimientos son controlados por una computadora; mide las propiedades viscoelástica y su interacción entre moléculas individuales.
MANTENIMIENTO Y PRECAUCIONES
1.       Al finalizar el trabajo, hay que dejar puesto el objetivo de menor aumento en posición de observación y  cubierto.
2.       Nunca hay que tocar las lentes con las manos, limpiar con papel filtro o papel de óptica.
3.       No dejar el porta objeto puesto sobre la platina si no se está utilizando el microscopio.
4.       Después de utilizar el objetivo de inmersión, hay que limpiar el aceite que queda en los objetivos.
5.       Después de utilizar el objetivo de inmersión, limpiar el aceite que queda en el objetivo con papel especial, si este se ha secado limpiar con una mezcla de alcohol-acetona (7:3) o xilol
6.        No forzar los tornillos giratorios del microscopio: macro y micrométrico, platina, revolver y condensador)
7.       El cambio de objetivo se hace girar el revólver y dirigiendo siempre la mirada a la preparación para prevenir el roce de la lente con la muestra. No cambiar agarrándolo por el tubo mismo ni hacerlo si se está observando a través del  ocular.
8.       Mantener seca y limpia la platina.
EMPLEO DEL OBJETIVO DE INMERSIÓN
1.       Bajar totalmente la platina.
2.       Subir el condensador para ver claramente el círculo de luz que nos indica la zona que se va a visualizar y donde habrá de echar el aceite.
3.       Girara el revólver hacia el objetivo de inmersión dejándolo en medio camino entre éste y el de 40X.
4.       Colocar una gota mínima de aceite de inmersión sobre el círculo de luz.
5.       Mirar el objetivo, subir la platina hasta que el lente toque la gota de aceite.
6.       Enfocar con el micrométrico. La distancia entre el objetivo y la preparación es mínimo, el riesgo de accidente es grande.
7.       Una vez puesto el aceite de inmersión sobre la preparación, no se puede volver a usar el objetivo 40X sobre esta zona, si se desea enfocar otro campo, bajar la platina y repetir la operación desde el paso 3.
8.       Una vez finalizada la observación bajar la platina, colocar el objetivo de menor aumento girando el revolver, retirar la preparación de la platina.
9.       Limpiar el objetivo de inmersión con papel especial.

FIJACIÓN
Método para preservar la morfología y la composición química de las células,  son:
§     Fijadores físicos como el aumento de temperatura sobre las condiciones normales:
o    disminución de la temperatura hasta la congelación.
o   eliminación de aguas hasta de desecación.
§     Fijadores químicos pueden ser.
o   Ácidos orgánicos como el acético y el láctico.
o   Ácidos inorgánicos como el clorhídrico nítrico.
o   Substancias químicas compuestas como:
§   mezclas de alcohol y ácido acético.
§  Fijados Carnoy
§  Mezcla de ácido
§  Licor de Flerming.
o   Mezclas de sales como el líquido de Muller.
El tiempo de fijación está, en relación inversa con la concentración del fijador.
 Las técnicas de fijación dependen de varios factores, como:
§     Calidad y cantidad de materiales a fijarse.
§     Observación directa
§     Observación mediante coloración posterior.
§     Realización de cortes, etc.
COLORACIÓN
La coloración de las preparaciones a observarse tiene por objetivo aumentar el contraste del material o poner de relieve determinadas estructuras. Se debe utilizar colorante que tiñan y diferencien los componentes celulares, de tejido o de órganos.
1.       Origen orgánico como el azafrán, violeta de genciana, carmín, etc.
2.       Por su carácter químico como la eosina, fucsina ácida, fast-green, etc.
3.       Básicos como el violeta de genciana, azul de metileno, azul de toluidina, verde de metilo, fucsina básica, safranina. Etc.
                  Azul de metileno: Azul de metileno  2g. +  aguas des. o alcohol 100ml.
                  Fucsina:  Fucsina ácida   0,5 g.  +   agua destilada...............100ml.
4.       Neutros como el rojo congo, giemsa, Wright

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